1、先检查样品是否过载
由于样品过载引起的峰形后拖不能通过改变色谱条件消 除。如果发现过载,需降 低进样量(包括进样体积或浓度),进样量越小,峰形越好,例子如头孢尼西钠的测定:
2、调节流动相pH
将流动相的pH调至比弱酸p Ka小2以上,比弱碱p Ka大2以上,可有 效抑 制易离子化待测物的电离,从而取得良好峰形。例子如二甲基苯氧乙酸的测定:
 碱性化合物中,甲胺的p Ka为10.64,那么在pH< 8.64的时候它是完 全呈离子态的, 那么pH在2.5~8.64时,特 别是pH6.7~8.64时,此时甲胺和硅羟基均以离子状态-NH3+和Si-O-形式存在的,它们之间相互吸引的静电作用导致后拖,这就是为什么很多碱性化合物在pH 7.0的条件下容易产生拖尾的原因。而很多色谱柱生产商也因此以阿米替林(含-N(CH3)2,碱性比-NH2强)在pH 7.0的条件下来评价和比较不同色谱柱之间的优劣,该条件下的阿米替林的峰形越好说明封尾越好。而在pH
3、增加缓冲盐或增 大缓冲盐的浓度
 流动相中加入缓冲盐,增 强了流动相的离子强度,在-NH3+等及性基团和硅羟基Si-O-之间存在着许多离子的干扰,减少了样品分子与硅羟基之间相互接触的机会,有 助于削弱及性基团与硅羟基之间的相互作用,改 善峰形。这种适合于碱性较弱(如氨基的N原子与强吸电子基相连),或碱性很强,但在刚性结构中,比较难 以接近被C18长链和封尾试剂覆盖的硅羟基,例子如高乌甲素的测定:
4、加入三乙胺、四丁基硫酸氢铵或辛烷磺酸钠
拖尾的产生是因为-NH2、-NHR、-NR2与硅羟基发生静电作用引起的,那么阻 碍它们之间静电作用的途径,应该有两种,一种是占据硅羟基这个作用位点,另一种是占据-NH2、-NHR、-NR2这个作用位点。
在流动相中加入三乙胺,能显 著的改 善峰形,消 除拖尾,其作用是屏蔽硅羟基。三乙胺的p Ka为11.09,在pH<11.09-2=9.09的条件下是以离子状态N+H(CH2CH3)3的形式存在的,因此pH在2.5~8.64 硅羟基呈Si-O-离子态的情况下,N+H(CH2CH3)3容易与Si-O-形成相对较强的静电吸引力。
加入三乙胺改 善峰形的时候,有两点需要注意:1)三乙胺的碱性很强,加入三乙胺后流动相的pH可能操出 色谱柱的使用范围,对色谱柱造成损商。pH的改变也会导致出峰时间的显 著变化,可能引起的其它问题,建议流动相中加入三乙胺后回调至未加入前的pH值。通常即使pH回调过后,由于三乙胺成为了固定相的一部分,保留时间也有较大变化;2)三乙胺在210nm处有比较强的吸收,如果液相方法中检测波长在210nm以下测定时需要谨慎使用。
四烷基季铵盐(如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等)在水中电离后,也形成了类似N+H(CH2CH3)3的结构N+(CH2CH2CH2CH3)4 ,这种结构也能有 效的与Si-O-产生较强的静电作用,阻止氨基与硅羟基的接触,改 善峰形。而且它还有一个不同于三乙胺的显 著特点是,它在低波长范围的吸收比三乙胺弱。
流动相中加入辛烷磺酸钠等烷基磺酸盐离子对试剂也能很 好的改 善峰形,其作用机理与三乙胺和四丁基硫酸氢铵颇为不同,是通过与样品分子的作用来阻止样品分子与硅羟基的作用来改 善峰形。