浅析 自动顶空气相色谱仪检测乙醇消毒剂仪器配置及分析方法
《乙醇消毒剂卫生标准》GB/T 26373-2010规定了乙醇消毒剂的原料要求和技术要求、应用范围、使用方法、检验方法、标志和包装、运输和贮存、标签和说明书及注意事项。适用于以乙醇为主要原料制成的乙醇消毒剂 ,包括乙醇与表面活性剂、食用色素、护肤成分和食用香精等配伍的消毒剂。不适用于乙醇与其他杀菌成分复配的消毒剂，也不适用以乙醇为溶剂的消毒剂。
对于乙醇消毒剂有效成分含量测定，公司采用顶空进样气相色谱仪建立消毒液中乙醇含量测定方法，提高测定方法的灵敏度和准确性。方法通过建立内标法和外标法，检测消毒液中乙醇含量，并经方法学验证。结果用外标法检测，回收率为 80.3% ～ 90.1% ，蕞低检测限为7. 90 mg / L，精密度为1.23% 。用内标法检测，回收率为 95. 1% ～ 106. 4% ，蕞低检测限为 1. 41 mg / L，精密度为1. 15% 。结论 内标法测定消毒液中乙醇含量比外标法更为灵敏、准确，重复性好。
1 材料与方法
1. 1 仪器及试剂材料
1.1.1 仪器：气相色谱仪 ，配氢火焰检测器( FID) ；顶空进样器；色谱柱( HP －INNOWAX，30m × 0. 25mm × 0. 25μm) ；电子分析天平；纯水机；氮氢空气源；色谱工作站。
1.1.2 试剂：无水乙醇( 分析纯) ，正丁醇( 分析纯) ，氯化钠( 分析纯) 均购自国药集团化学试剂有限公司，甲醇( Fisher Scientific，色谱纯) ，超纯水。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 仪器条件
进样口温度 280℃ ，分流比70∶ 1；载气为氦气，流速 1. 0 ml / min。
升温程序：50℃ ，保持 5 min；20℃ ，保持 3. 5 min；120℃ ，保持 2min；总运行 10. 5 min。
FID检测器温度 240℃ ，空气流速 300 ml/min，氢气流速 30 ml/min。
1. 2. 2 外标法
① 标准系列配制：用甲醇配制成乙醇质量浓度分别为 0、100、300、500、1 000 及2 000 mg / L 的乙醇标准系列，进样 1 μl，测其峰面积，以乙醇峰面积对其含量绘制标准曲线。
② 样品处理：取样品 1 ml，用甲醇定容至 10 ml 容量瓶中，混匀，逐级稀释1 000倍。10 000 rpm 离心 10 min，通过自动进样器直接进样，进样量为 1 μl。每批样品取 3 个平行样，每样重复测定 2 次。
1. 2. 3 内标法
① 对照溶液配制: 准确称取 1. 0 ～1. 1 g 正丁醇( 内标) ，1. 5 ～ 1. 7 g 乙醇，用纯水定容至 10 ml 容量瓶中，稀释 100 倍，进样 1 μl。
② 样品处理：分别准确称取 0. 1 g 氯化钠、1. 0 ～ 1. 2 g 正丁醇及 2. 0 ～ 2. 2 g 样品( 根据样品中乙醇含量高低确定样品量，尽可能使得试样与对照溶液中乙醇浓度相近) ，用纯水定容至 10 ml 容量瓶中，混匀后，稀释100 倍。10 000 rpm 离心 10 min，进样 1 μl。
1. 2. 4 方法学验证
①回收率：外标法，平行取 3份已知乙醇含量的免洗消毒液样品约 0. 5 g，分别加入 0. 05、0. 25 和 0. 45 g 无水乙醇，用纯水定容至 10ml 容量瓶中，混匀后，纯水稀释 100 倍。按照 1. 2. 1的仪器条件进行检测。内标法，分别称取 0. 1 g 氯化钠、1. 0 g 已知乙醇含量的消毒液样品及 0. 8 g 无水乙醇，用纯水定容至 10 ml 容量瓶中，混匀后，纯水稀释 100 倍。
②重复性：取同一批次的消毒液，配制 6 份供试品溶液，进行乙醇含量测定，用相对标准偏差表示。
③线性与范围：外标法，取对照品储备液，稀释成不同浓度样品，采用拟定的色谱条件测定，以浓度( X) 对峰面积( Y) 进行线性回归，考察线性范围。内标法，采用单点校正。
④蕞低检测限：取无水乙醇的甲醇 ( 水) 溶 液，逐级稀释，信 噪 比( S /N) 3∶ 1时对应的乙醇浓度为蕞低检测限。
2 结果
2. 1 色谱条件
经测定显示，外标法甲醇和乙醇可达到基线分离；内标法分离度正丙醇与乙醇计算大于 9，理论塔板数不小于20 000。
2. 2 线性范围和检测限
测定时，将样品稀释到含乙醇 2 000 mg /L 以内，允许其在选择线性范围，内标法采用单点校正；外标法线性良好，线性方程 Y = 2. 926 × 104X +1. 630 × 105，r = 0. 9999。检测限结果，外标法为7. 90 mg / L，内标法为 1. 41 mg / L。定量限结果，外标法为 26. 35 mg /L，内标法为 4. 70 mg /L。
2. 3 回收率试验结果
回收率试验结果表明，外标法回收率为 80. 3%～ 90. 1% ，RSD 为 1. 35% ; 内标法回收率为 95. 1%～ 106. 4% ，RSD 为 1. 21% 。
2. 4 检测精密度
取同一份含乙醇消毒液样品，配制成待测样品，分别平行测定 6 次，以 6 个结果求得精密度结果表明，外标法为 1. 23% ，内标法为 1. 15% 。
3 讨论
试验结果显示，用内标法检测消毒液中乙醇含量，具有实验条件影响小、准确度和精密度较高等优点。通过方法验证看出，对于凝胶类基质消毒剂，内标法结果优于外标法，而 2002 年版《消毒技术规范》中乙醇含量的测定采用的是外标法。由于不同基质消毒剂在水中或有机溶剂中溶解度不同，因而导致实际测定含量偏低。对于此类样品采用外标法直接进样分析检测，会因为部分析出而导致测定浓度低于实际浓度。本实验所用内标法通过加入氯化钠增大样品组分活动系数，使凝胶充分溶解，因而提高了加样回收率。实践证明，含乙醇的凝胶类及其类似剂形，推荐用内标法测定乙醇含量。
山东谱析科学仪器有限公司
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