峰型问题是液相色谱仪的主要问题,在做液相分析过程中,我们就是要变换不同的条件来改变不好的峰型,对于样品的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。
1、色谱图中未出峰 系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整。
2、一个峰或几个峰是负峰 流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。
3、出的峰均为负峰 信号电缆接反或检测器输出及性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。
4、出的峰均为宽峰 系统未达到平衡;溶解样品的溶剂及性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效低了;温度变化造成的影响。
5、所出峰比预想的小 样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。
6、出现俩峰或肩峰 进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰:进样量或样品浓度高,溶解样品的溶剂较流动相多;保护柱或色谱柱污染或失效。
①柱温低:升高柱温;②样品溶剂选择不恰当:使用流动相作为样品溶剂;③样品过载:减少样品含量;④色谱柱损坏:换柱子。
8、拖尾峰:柱过载,减少样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用,加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度减少流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大,将连接点改低;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降,换柱子;采用保护柱,对柱子进行老化。
9、出现平头峰 检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现多峰 进样阀残余峰,可能为上次样品的残余。在每次进完样后用时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,换流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加快流速。
11、峰分叉 ①保护柱或分析柱污染:取下保护柱再进行分析,如果不行换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,换筛板或换色谱柱。②样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。
12、峰变形 样品过载,减少样品载量。
13、早出的峰变形 样品溶剂选择不恰当 ①减少进样体积 ②运用低及性样品溶剂
14、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 柱外效应 ①调整系统连接(使用短、内径小的管路)
②使用小体积的流通池
15、酸性或碱性化合物的峰拖尾 缓冲不适合①使用浓度50~100 mM的缓冲液②使用等于流动相pH值的缓冲液
16、额外的峰 (1)样品中有其他组分:正常现象;(2)、进样的洗脱峰:①增加运行时间或梯度斜率②增加流速;(3)空位或峰:①检查流动相是否干净 ②使用流动相作为样品溶剂 ③减少进样体积。